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高遷移率族蛋白B1對大鼠脾臟樹突狀細胞免疫功能影響及機制研究

高遷移率族蛋白B1(HMGB1)作為一種晚期炎癥介質，介導了膿毒癥和其他系統性炎癥的致死性效應，研究其病理生理作用將有助于深化對膿毒癥發病機制的認識，并為免疫反應的調控提供潛在的干預目標。本試驗擬應用HMGB1體外刺激大鼠脾臟樹突狀細胞(DC)，闡明HMGB1對DC免疫功能的影響并對其機制進行初步探討，旨在為膿毒癥及多器官功能障礙綜合征的預防和治療提供新思路。 方法：分離正常Wistar大鼠脾臟DC，在含10％小牛血清的1640培養液中調整細胞濃度1×10<'6>/孔后置于24孔培養板。實驗一：采用HMGB1刺激，觀察HMGB1刺激與DC表面共刺激分子CD80、CD86和主要組織相容性復合物(MHC)Ⅱ表達、細胞因子白介素(IL)-12、腫瘤壞死因子(TNF)-α基因表達和蛋白合成的時間-效應關系及劑量-效應關系。實驗二：HMGB1刺激后，采用激光掃描共聚焦顯微鏡和流式細胞術檢測DC表面晚期糖基化終末產物受體(RAGE)的表達強度。同時觀察抗RAGE抗體對HMGB1刺激后DC表面共刺激分子CD80、CD86和MHC Ⅱ表達的影響。實驗三：采用1μg/ml的HMGB1刺激48小時(h)，DC與脾T淋巴細胞的細胞比例分別為1：50、1：100、1：150、1：200混合，于共同作用后3天、5天觀察T淋巴細胞增殖反應、功能性極化、IL-2、白介素-2受體(IL-2R)基因/蛋白表達及核因子(NF)-кB活性的情況。 結論： 1．HMGB1能誘導DC表面共刺激分子表達增強和IL-12、TNF-α的合成、釋放，HMGB1可能是誘導DC成熟的重要免疫刺激信號。 2．HMGB1能上調DC受體RAGE表達，RAGE可能是參與HMGB1誘導DC成熟分化的主要受體之一。 3．HMGB1誘導的DC使脾T淋巴細胞對絲裂原刺激的增殖反應明顯增強，并促進T淋巴細胞向Th1功能性極化。 4．初步明確了HMGB1誘導的DC影響脾T淋巴細胞IL-2生成和IL-2R表達的相關信號轉導通路。