組織細胞總蛋白抽提試劑盒培養(yǎng)細胞蛋白提取


描述：從組織細胞中提取總蛋白是 Western Blot 的關鍵步驟。實體軟組織如腦脊髓富含磷脂，神經(jīng)血管含大量結(jié)締組織，而脂肪則含有大量油脂，常規(guī)的方法難以有效從這些組織中提取蛋白。本試劑盒為組織或培養(yǎng)細胞總蛋白提取提供完整的解決方案。用裂解-結(jié)合緩沖液勻漿裂解實體組織，或直接用裂解-結(jié)合緩沖液重懸培養(yǎng)細胞，然后加入抽提試劑去除非蛋白成分，離心、干燥后即可得到總蛋白。蛋白沉淀溶解后用常規(guī)方法進行蛋白定量。提取過程可在 30-60 分鐘內(nèi)完成，可在 1.5mL 離心管微量提取也可大規(guī)模制備，為簡便高效。

規(guī)格： 50次  100次

儲存：室溫或4oC   24個月有效

培養(yǎng)細胞蛋白提取 (參見固體組織蛋白提取程序中的斜體字注解)

1.         消化洗滌并 800 g 離心收集細胞。每 5-10 × 106 細胞加入 0.5 mL 裂解液，振蕩重懸，4oC 凈置 2 分鐘。

2.         按比例每 0.5 mL 裂解液加入 1 mL 抽提試劑，振蕩混勻。4oC 靜置 10min。

3.         10,000g 4oC 離心 10 分鐘，溶液分為兩相，兩相中間為蛋白膜。小心吸除上層相和大部分下層相，保留兩相中間的蛋白絮狀物。如果不能分相，可再加入 50μl 蒸餾水混勻離心。

4.         加入 1 mL 純乙醇洗滌沉淀。10,000g 4oC 離心 3 分鐘，蛋白沉淀在管底。

5.         去除管中所有液體，敞開管口，室溫空氣干燥蛋白沉淀。未溶解的蛋白沉淀不含鹽、去垢劑、和還原劑成分，可4oC或－20oC 一年以上。

說明

1.         按照上述提取和溶解過程，不加蛋白酶抑制劑，而蛋白不會有明顯降解，用戶不必(但可以)加入蛋白酶抑制劑。

2.         蛋白定量。注意使 SDS 濃度稀釋到不影響蛋白定量的水平，或選擇不受 SDS 影響的 BCA 定量方法。BCA 法<5% SDS濃度，Bradford 法<0.125% SDS 濃度。

3.         按比例可進行大規(guī)模的(多至1 g) 組織蛋白提取。

提取試劑對眼睛和呼吸系統(tǒng)有一定刺激性，皮膚不慎接觸可用水清洗。