植物乙烯（ETH）ELISA試劑盒應該怎么用？

產品簡介：

乙烯是由兩個碳原子和四個氫原子組成的化合物。兩個碳原子之間以雙鍵連接。乙烯存在于植物的某些組織、器官中，是由蛋氨酸在供氧充足的條件下轉化而成的。
乙烯是合成纖維、合成橡膠、合成塑料（聚乙烯及聚氯乙烯）、合成乙醇（酒精）的基本化工原料，也用于制造氯乙烯、苯乙烯、環氧乙烷、醋酸、乙醛、乙醇等，尚可用作水果和蔬菜的催熟劑，是一種已證實的植物激素。
乙烯是世界上產量zui大的化學產品之一，乙烯工業是石油化工產業的核心，乙烯產品占石化產品的75%以上，在國民經濟中占有重要的地位。世界上已將乙烯產量作為衡量一個國家石油化工發展水平的重要標志之一。
生理作用是：三重反應、促進果實成熟、促進葉片衰老、誘導不定根和根毛發生、打破植物種子和芽的休眠、抑制許多植物開花（但能誘導、促進菠蘿及其同屬植物開花）、在雌雄異花同株植物中可以在花發育早期改變花的性別分化方向等。

實驗原理：

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中植物乙烯（ETH）水平。用純化的植物乙烯（ETH）捕獲抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被的微孔中依次加入植物乙烯（ETH），再與HRP標記的檢測抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的植物乙烯（ETH）呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中植物乙烯（ETH）含量。

植物乙烯（ETH）ELISA試劑盒應該怎么用？

操作步驟：

1.標準品的加樣：設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；。
2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3.加酶：每孔加入酶標試劑100μl，空白孔除外。
4.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘。
5.配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用。
6.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
7.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘. 
8.終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
9.測定：以空白孔調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

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實驗時需要注意哪些：

1、試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

2、濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

3、各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間zuihao控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。

4、請每次測定的同時做標準曲線，zuihao做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數（×n×5）。

5、封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6、底物請避光保存。

7、嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

8、所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9、本試劑不同批號組分不得混用。

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