信帆為您提供樹脂包埋（透射電鏡）實(shí)驗(yàn)代測

樹脂包埋是將客戶處理后固定在電鏡固定液中的標(biāo)本，進(jìn)行修整、鋨酸后固定、脫水等過程后，采用進(jìn)口812環(huán)氧樹脂作為包埋劑，將組織標(biāo)本包埋在樹脂中。經(jīng)過此種樹脂包埋的樣本適合進(jìn)行超薄切片，透射電鏡觀察。
 

樹脂包埋實(shí)驗(yàn)步驟：

1、取材：電鏡取材非常嚴(yán)格，取材過程中速度要快，5分鐘內(nèi)要將組織取出放入固定液中；取材組織塊要小，一般要求將組織切成1立方毫米大??；取材部位要準(zhǔn)確、取材溫度要低是在4℃條件下進(jìn)行；取材工具要干凈，鋒利。如果是貼壁細(xì)胞不可用酶消化下來，先吸去培養(yǎng)液然后加入電鏡固定液用橡膠塊刮下細(xì)胞，離心，細(xì)胞體積保證綠豆大小即可，然后吸去上清更換固定液繼續(xù)固定。

2、固定：取材后要及時(shí)固定，組織、細(xì)胞、蛋白等固定選用2.5%中性戊二醛固定液，植物等標(biāo)本則需要選用多聚甲醛和戊二醛的混合固定液。室溫固定兩小時(shí)左右后，放入4℃保存運(yùn)輸（如果是植物或者肺組織，則需要進(jìn)行真空抽氣固定，一般需要抽氣固定24小時(shí)左右，直至標(biāo)本*沉入容器底部）。

3、鋨酸后固定：將標(biāo)本從固定液中取出，用0.1mol/L的PB清洗并過夜，第二天轉(zhuǎn)入1%鋨酸后固定，固定時(shí)間普通標(biāo)本2h左右，植物標(biāo)本8至12h左右。

3、脫水：鋨酸固定后的標(biāo)本用用0.1mol/L的PB清洗后使用梯度乙醇脫水，濃度依次是50%、70%、80%、90%、95%、100%，植物標(biāo)本則會(huì)在50%乙醇前面再增加一個(gè)30%乙醇梯度，脫水時(shí)間普通標(biāo)本為10~15min，植物標(biāo)本脫水時(shí)間為1~1.5h

4、浸透：用丙酮作為乙醇和樹脂間的過度溶劑，從純丙酮開始，中間經(jīng)過丙酮和樹脂的混合劑，混合比例丙酮從高到低到純樹脂，整個(gè)浸透過程需要1~2天完成。

5、包埋：先將組織對應(yīng)的標(biāo)簽放包埋板中，然后加入樹脂，再將浸透好的樣本放入包埋板中，調(diào)整好包埋面，然后放入恒溫箱內(nèi)熟化，熟化過程需要2~3天。熟化完成后，樣本樹脂包埋完成。

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注意事項(xiàng)：
 

1、透射電鏡對取材要求嚴(yán)格，取材過程中速度要快，5分鐘內(nèi)要將組織取出放入固定液中；取材組織塊要小，一般要求將組織切成1立方毫米大??；取材部位要準(zhǔn)確、取材溫度要低，是在4℃條件下進(jìn)行；取材工具要干凈，鋒利。如果是貼壁細(xì)胞不可用酶消化下來，先吸去培養(yǎng)液然后加入電鏡固定液用橡膠塊刮下細(xì)胞，離心，細(xì)胞體積保證綠豆大小即可，然后吸去上清更換固定液繼續(xù)固定。

2、2.5%戊二醛固定液要選擇在保質(zhì)期內(nèi)（固定液變黃不可用），固定液的量要足夠，至少是組織的10倍以上，如果組織固定過程中固定液明顯變黃也需要更換一次固定液；植物組織要選擇戊二醛和多聚甲醛的混合固定液；植物和肺組織由于標(biāo)本本身含有大量氣體，會(huì)導(dǎo)致固定液無法進(jìn)入標(biāo)本內(nèi)部達(dá)不到充分固定，所以需要真空抽氣固定。

3、樹脂包埋的樣本可以常溫保存，但是由于樹脂會(huì)吸潮變軟，所以在切片前需要提前放入60℃恒溫箱中烘烤12小時(shí)及以上，樣本烘烤時(shí)不能被密封，需要單獨(dú)放入紙盒或者金屬盒中。

4、樣本在取材、固定、運(yùn)輸?shù)冗^程中不可冰凍、結(jié)冰，結(jié)冰會(huì)對樣本的超微結(jié)構(gòu)造成冰晶損傷。

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