過氧化物酶(POD)檢測試劑盒用過的都說好！

微量法（100管96樣）

測定意義：
POD（EC 1.11.1.7）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中，可催化過氧化氫氧化酚
類和胺類化合物，具有消除過氧化氫和酚類、胺類毒性的雙重作用。
測定原理：
POD 催化H2O2 氧化特定底物，在470nm 有特征光吸收。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽、冰
和蒸餾水
試劑的組成：
提取液：液體100mL×1 瓶，4℃保存；
試劑一：液體20mL×1 瓶，4℃保存；
試劑二：液體×1 瓶，4℃保存；用時加入3mL 試劑一充分溶解待用；用不完的試劑4℃保存；
試劑三：液體3 mL×1 瓶，4℃保存。
粗酶液提取：
1、細菌、細胞或組織樣品的制備：
細菌或培養細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量
（104 個）：提取液體積（mL）為500~1000：1 的比例（建議500 萬細菌或細胞加入1mL 提
取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復30 次）；
8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
組織：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10 的比例（建議稱取約0.1g 組織，
加入1mL 提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
2、血清（漿）樣品：直接檢測。

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測定步驟：
1、 分光光度計或酶標儀預熱30min 以上，調節波長至470nm，蒸餾水調零。
2、 測定前將試劑一、二和三在37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）放置10min 以上。
3、 樣本測定表
試劑名稱（μL） 測定孔
樣本 10
蒸餾水 60
試劑一 120
試劑二 30
試劑三 30
在微量石英比色皿或96 孔板中按順序加入上述試劑，立即混勻并計時，記錄470nm 下30s
時的吸光值A1 和1min30s 后的吸光值A2。計算ΔA＝A2-A1。
注意：
1、若一次性測定樣本較多，可將試劑一、二、三和蒸餾水按比例配成混合液，在37℃（哺
乳動物）或25℃（其它物種）放置10min 以上，測定時加入10μL 樣本和240μL 混合液測
定。
2、如果ΔA 小于0.005，可將反應時間延長到5min。如果ΔA 大于0.5，可將樣本用提取液
稀釋后測定，計算公式中乘以相應稀釋倍數。

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