鈣檢測試劑盒(鄰甲酚酞絡合酮微板法)的自備材料

產品簡介：

鈣(Calcium)是一種金屬元素，常溫下呈銀白色晶體，動物的骨骼、蛤殼、蛋殼都含有碳酸鈣，檢測生命體鈣含量，主要通過檢測鈣離子濃度實現的，用分光度法檢測鈣較為常見，該法需要合適的金屬指示劑或選擇性結合鈣離子后引起變色的染料化合物，目前較為常用的染料有鄰-甲酚酞絡合酮(OCPC)、偶氮砷Ⅲ、甲基麝香草酚藍(MTB)等。鈣檢測試劑盒(鄰甲酚酞絡合酮微板法)是利用溶液中鈣離子在堿性條件下能與 OCPC 結合，生成紫紅色的絡合物，加入鎂離子螯合劑，去除鎂離子背景干擾，通過酶標儀檢測 575nm 處吸光度，根據公式計算出總鈣含量；該法的優點：1、是國際上推薦的血清鈣的常規檢測方法；2、試劑單一，操作簡便；3、靈敏度高；4、顯色穩定 5、使用樣本量小。該試劑盒僅用于科研領域，不適用于臨床診斷或其他用途。

操作步驟(僅供參考)：

1、制備樣品：

①血漿、血清樣品：血漿、血清按照常規方法制備，可以直接用于該試劑盒的測定，-20℃凍存，用于 Ca 的檢測。

②細胞或組織樣品：取恰當細胞或組織進行勻漿，低速離心取上清，-20℃凍存，用于Ca 的檢測。

③高濃度樣品：如果樣品中含有較高濃度的 Ca，可以使用 ddH2O 稀釋，不宜使用普通蒸餾水稀釋。

④(選做)樣品準備完畢后可以用 BCA 蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度，以便于后續計算單位蛋白重量組織或細胞內的 Ca 含量。

2、配制 Ca 顯色工作液：臨用前，取 Ca Assay Buffer 和 OCPC 顯色液等量混合，即為 Ca顯色工作液，即配即用，4℃ 避光保存，不宜久置。

3、Ca 加樣：選用經稀鹽酸處理及去離子水清潔的 96 孔板，按照下表設置空白孔、標準孔、測定孔，溶液應按照順序依次加入，并注意避免產生氣泡；如果樣品中的鈣離子含量過

高，可以減少樣品用量或適當稀釋后再進行測定，樣品的檢測最好能設置平行孔。

參考區間：健康成年人血清鈣濃度：2.1~2.6mmol/L

兒童血清鈣濃度：2.25~2.67mmol/L

性能指標：

線性范圍：1.25~5.0mmol/L 回收率：98%~101.5%

批內 CV：1.08%~1.60% 批間 CV：3.05%~4.12%

注意事項：

1、 溶血樣本對檢測有干擾，盡量避免采用溶血樣本。

2、 OCPC 顯色液偶爾會結晶析出，配制成的顯色工作液有時會析出，可取上清液使用。

3、 該試劑盒對鈣離子敏感度較高，測定器皿一定要干凈，最好使用一次性聚乙烯塑料器皿。

4、 可用血清或肝素抗凝血漿樣本，不宜采用鈣螯合劑及草酸鹽做抗凝劑的樣本。

5、 膽紅素可產生負干擾，含有較高膽紅素的樣本可用血清對照消除該干擾。

6、 本法能夠用于自動生化分析儀終點檢測法。

7、 在該試劑盒條件下建議待測樣品中鈣離子濃度應大于 0.5mmol/L 為宜，否則有可能造成檢測誤差。

8、 如果樣品濃度過高，應用蒸餾水稀釋后重測，結果乘以稀釋倍數。

有效期：6 個月有效；常溫運輸，4℃保存。