維生素 C 檢測試劑盒(磷鉬酸微板法)的產品介紹

產品簡介：

維生素 C(Vitamin C)又稱 L-抗壞血酸，是高等靈長類動物與其他少數生物的必需營養素，在生物體內維生素 C 是一種抗氧化劑，為酸性己糖衍生物，是稀醇式己糖酸內酯，保護身體免于自由基的威脅，同時也是一種輔酶，其廣泛的食物來源為各類新鮮蔬果。Vc 有L-型和 D-型兩種異構體，只有 L-型的才具有生理功能，還原型和氧化型都有生理活性。

維生素 C 檢測試劑盒(磷鉬酸微板法)檢測原理是在強酸和偏磷酸根離子存在條件下，鉬酸銨能與還原型維生素 C 反應生成藍色化合物，在一定濃度范圍吸光度值與濃度呈線性關系，以酶標儀 760nm 處檢測吸光度，獲得 Vitamin C 含量。該試劑盒主要用于植物組織中的還原型維生素 C(抗壞血酸)的檢測，其優點是：1、反應迅速；2、操作簡便；3、還原糖及其他常見的還原物質對實驗沒有干擾，專一性好。本試劑盒僅用于科研領域，不宜用于臨床診斷或其他用途。 

自備材料：

1、蒸餾水

2、電子天平、研磨器或勻漿器

3、離心機、離心管或試管、水浴鍋或恒溫箱、酶標儀、96 孔板

操作步驟(僅供參考)：

1、配制組織勻漿液：按組織勻漿液 A:組織勻漿液 B:蒸餾水=8:1:91 的比例混勻即得。

2、準備樣品：取待測材料如青菜、水果、松針等，清洗擦干，準確稱量 1g，加入研磨器

內，再加入少量組織勻漿液，研磨碎，留取上清，再次用組織勻漿液研磨，最后一并倒入 10ml 離心管，補充組織勻漿液至 10ml，充分混勻，4000r/min 離心 5min，取 0.05ml 上清液，加入等量蒸餾水，即為待測液。

3、配制 MPA 工作液：稱取 0.3g MPA 粉末，充分溶解于 10ml 酸性緩沖液Ⅰ中，也可根據使用情況稱取一定量的 MPA 按比例溶解即可，4℃保存 3~4 天有效。

4、配制 Vitamin C Assay buffer：取鉬酸銨粉末 0.5g，充分溶解于 10ml 蒸餾水中，也

可根據使用情況稱取一定量的鉬酸銨加水按比例溶解即可，4℃避光保存。注意：鉬酸銨溶于水會逐漸變化成乳白色濁液，則不能使用。

5、配制系列 Vitamin C 標準：將 25mg Vitamin C 標準用 1ml 組織勻漿液溶解即得

Vitamin C 標準(25mg/ml)，再用蒸餾水稀釋成 Vitamin C 標準(250ug/ml)，取干凈離心管或試管，按下表進行操作，依次稀釋。Vitamin C 標準(25mg/ml)放置-20℃，短期保存。

6、Vitamin C 加樣：按照下表設置空白孔、標準孔、測定孔，溶液應按照順序依次加入，并注意避免產生氣泡。如果樣品中的 Vitamin C 含量過高，可以減少樣品用量或適當稀釋后再進行測定，樣品的檢測最好能設置 2 平行孔，求平均值。

7、Vitamin C 測定：立即混勻，30℃水浴 20min，空白調零，以酶標儀測定 760nm 處系列標準孔、測定孔的吸光度。

計算：以系列標準 Vitamin C (50、75、100、125、150、200、250μg/ml)為橫坐標，

以對應的吸光度為縱坐標，繪制標準曲線，求得回歸方程，以測定孔的吸光度代入回歸方程

求得樣品維生素 C 含量。

100g 樣品中維生素 C 含量(mg)

=(c0×V1)×100/(m1×1000)=(c0×V1) /(m1×10)

式中：c0 :待測樣品的吸光度值在標準曲線上查出的維生素 C 的濃度(μg/ml)

V1 : 待測液的總體積(ml)

m1 : 樣品質量(g)

1000 : μg 換算成 mg

注意事項：

1、 Vitamin C 標準避免反復凍融，以免失效或效率下降。

2、 組織勻漿液 A 保存溫度過低時易產生結晶，可用溫水浴溶解后再使用。

3、 Vitamin C Assay buffer 室溫保存時間過長或者過期會出現白色粘稠物，不可使用，應換新的產品使用。不使用時建議 4℃保存。

4、 待測樣品如不能及時測定，應置于 2~8℃保存，3 天內穩定。

5、 如果樣品濃度過高，應用蒸餾水稀釋后重測，結果乘以稀釋倍數。

有效期： 6 個月有效。常溫運輸和保存。

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