大家在用明膠酶譜法測(cè)定MMP2/9活性的時(shí)候，總是會(huì)遇到一些不同的問(wèn)題，現(xiàn)在我們就把實(shí)驗(yàn)中的一下小貼士告訴大家，供大家參考。

1.做酶譜要測(cè)定樣品蛋白的濃度（同Western blot，建議用BCA法）；
2.酶譜法是測(cè)定樣品中MMP-2、9活性的，如果煮沸使蛋白變性就沒(méi)有用了，故禁忌煮沸；
3.上樣緩沖液中也不能加β-巰基乙醇，這點(diǎn)由western blot轉(zhuǎn)作明膠酶譜的朋友切記、切記；
4.蛋白上樣量必須保證一樣，不會(huì)出現(xiàn)一致的透明條帶，如果不能保證上樣量一致，測(cè)出的相對(duì)活性也沒(méi)有統(tǒng)計(jì)分析的意義；
5.上樣時(shí)zui重要的一點(diǎn)，必須在4℃環(huán)境中操作，我用的是冰臺(tái)，同時(shí)所用的蛋白樣品（-80℃冰箱）不能是以前曾解凍使用過(guò)的，必須是新取出的，因?yàn)橹灰鈨鼍蜁?huì)有部分酶降解，影響你的結(jié)果。此外做過(guò)一次酶譜的蛋白樣品也不要反復(fù)使用，下次應(yīng)使用其它已分裝、未解凍過(guò)的樣品；
6.電泳后的步驟很簡(jiǎn)單，液體別配錯(cuò)，照著方法做就可以了。

如果你曾做過(guò)Western blot，在這里恭喜你了，只要注意幾個(gè)小細(xì)節(jié)，明膠酶譜對(duì)你非常簡(jiǎn)單。

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